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卵巢早衰动物模型

编辑:   上传日期:2017-07-31  阅读次数:

临床的卵巢早衰(POF)是指卵巢功能提前减退,常见为女性在40岁以前出现闭经,以闭经,不育,雌激素缺乏以及促性腺激素水平升高为特征的一种疾病。在人群中发病率为1%~3%,在继发性闭经中占2%~10%,诊断以至少半年或半年以上闭经多次发生,排除其他原因为基础,卵巢早衰是妇科分泌领域的常见病。

卵巢早衰动物模型

POF病因多种多样,具体发病机制尚不清楚,为了寻找病因和有效的治疗方法,就必须建立与人类临床表现和发病机制相似的动物模型。国内外专家学者根据POF的病因的多样性建立了不同的动物模型。

1、材料与方法

1.1 实验材料
雌性Wistar大鼠。

1.2 实验动物分组
本实验选用雌性Wistar大鼠40只,体重260~300 g,随机分成2组。正常对照组:20只。实验模型组:20只。

1.3 实验方法
1.3.1 POF大鼠模型制备 实验模型组雌性Wistar大鼠用雷公藤多甙片(10 mg/片),0.6 mg/(100 g?d)体重,灌胃1次/d,连续9d,建立POF动物模型。
1.3.2 组化标本制备
对实验动物用1%戊巴比妥钠(40ml/kg)腹腔麻醉后开胸,经左心室70滴/min滴入1%肝素钠的生理盐水500ml,同时剪开右心耳。继用0.1m磷酸盐缓冲液(PBS,PH=7.4)配制的固定液(含4%多聚甲醛)灌流固定。取出实验动物的卵巢组织,放入含4%多聚甲醛PBS的固定液中进行后固定大约2h,之后将实验动物的卵巢组织切成薄片移入含20%蔗糖的PBS中。在4℃冰箱中存放,至组织薄片沉底,经水包埋,恒冷箱连续横切片,片厚20μm。经OCT包埋,恒冷箱连续切片,片厚16 μm,-70℃保存备用。
1.3.3 尼氏染色
冷冻切片吹干,经PBS漂洗5min3次,将切片置入1%甲苯胺蓝溶液中37℃孵育90min,取出后用蒸馏水冲洗,PBS漂洗5min3次,梯度乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封片,光湿微镜下观察。

2、结果

尼氏染色结果:
正常对照组大鼠卵巢的尼氏染色切片上,卵泡数目正常,卵泡无闭锁,间质无明显增生。
实验模型组大鼠卵巢可见卵巢萎缩,卵泡数目减少,卵泡闭锁增多,间质增生明显。
根据尼氏染色结果证明POF动物模型制备成功。

3、讨论

由于POF的病因与发病机理尚不清楚,为了寻找此病的有效的治疗方法及发生发展规律,建立切实可靠的POF模型显得由为重要。根据目前的各种造模结果来看,新葡京在线型POF模型简单可靠,容易操作,可作为研究POF的模型,但是由于方法还不够成熟,需要更进一步的探讨新葡京在线的剂量与给要时间以造出最理想的模型。为临床的治疗提供有效数据,造模型的同时,更要探讨对其他一些器官的影响。如肝、肾、神经系统等,这会对人类的健康具有更大的意义。

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