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抗体制备服务企业

编辑:   上传日期:2015-10-19  阅读次数:

抗体的制备服务

根据制备的原理和方法,抗体制备服务可分为三类:多克隆抗体、单克隆抗体、基因工程抗体。

 :美迪西多克隆抗体制备服务拥有专业的抗体制备人员、先进的抗体制备生产仪器、引进先进的制备技术,美迪西根据客户需求专业打造制备方案,主要提供的动物选择包括兔、小鼠、大鼠等。

 :美迪西单克隆抗体制备服务内容 (1)免疫和ELISA检测:客户提供蛋白质或多肽与载体蛋白(如KLH)偶联,需要约4mg蛋白质免疫源或5~10mg多肽,免疫5只Balb/c小鼠,采血用ELISA进行检测。  (2)融合和帅选:用小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合,得到的杂交瘤细胞通过增殖和ELISA筛选得到高效价的克隆。(3)亚克隆和交付结果:挑选两个最好的克隆进行亚克隆和亚型鉴定,交付结果包括每个克隆一瓶细胞核5ml培养上清。

 :研究成功的基因工程抗体有:嵌合抗体、重构抗体、小分子抗体等。


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Email:marketing@medicilon.com.cn

电话:021-58591500

网站:www.medicilon.com.cn


一、多克隆抗体制备服务

大多数天然抗原物质(如细菌或其分泌的外毒素以及各种组织成分等)往往具有多种不同的抗原决定簇,而每一决定簇都可刺激机体产生一种特异性抗体。
多克隆抗体是多个抗原决定簇刺激机体后,由多个免疫淋巴细胞分泌的多种抗体的混合物。

抗体制备 

多克隆抗体的制备方法

由于这种抗体是不均一的,无论是对抗体分子结构与功能的研究或是临床应用都受到很大限制,因此称为第一代抗体;



二、单克隆抗体制备
在机体淋巴组织内可存在千百种抗体形成细胞(即B细胞),每种抗体形成细胞只识别其相应的抗原决定簇,当受抗原刺激后可增殖分化为一种细胞群,这种由单一细胞增殖形成的细胞群体可称为细胞克隆(clone)。
同一克隆的B细胞可合成和分泌在理化性质、分子结构、遗传标记以及生物学特性等方面都是完全相同的均一性抗体,亦可称之为单克隆抗体。单克隆抗体为只针对某一特定的抗原决定簇,纯度高的抗体,因此称为第二代抗体。

1、优点
(1)制备时不需纯化抗原就可得到纯抗体;   (2)有很高的效价
(3)有高度的单一性、均一性;          (4)产量高,且可连续生产

2、单克隆抗体制备基本原理
体内免疫法很难获得单克隆抗体,如能将所需要的抗体形成细胞选出,并能在体外进行培养,就可以获得已知特异的单克隆抗体。
抗体制备
杂交瘤细胞:既具有骨髓瘤细胞能大量无限生长繁殖的特性,又具有抗体形成细胞合成和分泌抗体的能力。这种抗体是由识别一种抗原决定簇的细胞克隆所产生的均一性抗体,故称之为单克隆抗体。
应用杂交瘤技术可获得几乎所有抗原的单克隆抗体,只要这种抗原能引起小鼠的抗体应答。
(1)DNA合成
 ① 主要途径:参考生物化学,可被氨基喋呤(A)所阻断
 ② 旁路途径:利用次黄嘌呤(H)和胸腺嘧啶核苷(T)合成DNA;
        所需要的酶为次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)、胸腺嘧啶核苷激酶(TK)。
(2)骨髓瘤细胞:来源于BABC/ c小鼠的骨髓瘤细胞系;没有合成抗体的能力;体外具有无限生长繁殖的能力;丧失合成HGPRT和TK的能力;只能通过主要途径合成DNA;在含有次黄嘌呤(H)、氨基喋呤(A) 、胸腺嘧啶核苷(T)的HAT培养基中不能生长。
(3)免疫淋巴细胞:通常来源于BALB/c小鼠的脾淋巴细胞;具有合成抗体的能力;具有合成HGPRT和TK的能力;能通过主要途径和旁路途径合成DNA;HAT培养基中能生长,但短寿,只能存活几天,体外不具有无限生长繁殖的能力
(4)融合剂:Kohler和Milstein最早仙台病毒;后来发现聚乙二醇(PEG)的融合效果更好,且避免了病毒的污染问题。
(5)杂交瘤细胞:具有合成抗体的能力(从免疫淋巴细胞获得);具有合成HGPRT和TK的能力(从免疫淋巴细胞获得);能通过主要途径和旁路途径合成DNA;HAT培养基中能生长;体外具有无限生长繁殖的能力(从骨髓瘤细胞获得)。
(6)饲养细胞:单个或少数细胞在体外培养很难成活,必需加入其他细胞以增加细胞密度,维持其代谢,使之成活繁殖;被加入的这种细胞称为“饲养细胞”。最常用的小鼠腹腔巨噬细胞。

3、单克隆抗体制备过程:
制备抗原 → 免疫动物 → 免疫脾细胞和骨髓瘤细胞的制备 → 细胞融合 → 杂交瘤细胞的选择培养 → 杂交瘤细胞的的筛选
→ 杂交瘤细胞的克隆化 → 单克隆抗体的检定 → 杂交瘤细胞系的建立 → 单克隆抗体的大量制备(动物体内诱生法和体外培养法)

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4、单克隆抗体的应用
(1)诊断试剂:用于各种病原体以及肿瘤的诊断。
(2)治疗试剂:兽医临床上传染病的治疗;医学临床上抑制器官移植排斥、治疗自身免疫疾病、制备生物导弹。
(3)检测试剂:各种病原体毒力因子的检测;各种免疫细胞及其它组织细胞表面分子的检测。

三、基因工程抗体(genetically engineering antibody)
自1975年单克隆抗体杂交瘤技术问世以来,单克隆抗体在医学中被广泛地应用于疾病的诊断及治疗。但目前绝大数单克隆抗体是鼠源的,临床重复给药时体内产生抗鼠抗体,使临床疗效减弱或消失。因此,医学临床上最理想的单克隆抗体应是人源的,但人-人杂交瘤技术目前尚未突破。
目前较好的解决办法是能研制基因工程抗体,以代替鼠源单克隆抗体用于临床。基因工程抗体兴起于80年代早期,是利用DNA重组技术,在分子水平对抗体基因进行切割、拼接或修饰,或人工合成后导入受体细胞表达,从而产生的新型抗体,也称为第三代抗体。

研究成功的基因工程抗体有:嵌合抗体、重构抗体、小分子抗体等。


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