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iTRAQ实验技术服务

编辑:   上传日期:2017-06-27  阅读次数:

iTRAQ技术原理: 

iTRAQ试剂为可与氨基酸N端及赖氨酸侧链连接的胺标记同重元素(isobaric)。在质谱图中,任何一种iTRAQ试剂标记的不同样本中的同一蛋白质表现为相同的质荷比。
在串联质谱中,信号离子表现为不同质荷比(114~117)的峰,因此,根据波峰的高度及面积,可以得到蛋白质的定量信息。 

iTRAQ试剂结构:

iTRAQ试剂是一种小分子同重元素化学物质,包括三部分:
一端是报告部分 reporter group;
另一端是肽反应部分 peptide reactive group;
中间部分是平衡部分 balance group。
其中: reporter group:质量为114Da、115 Da、116 Da、117 Da,因此iTRAQ试剂共四种。
? peptide reactive group:将reporter group与肽N端及赖氨酸侧链连接,几乎可以标记样本中所有蛋白质。
? balance group:质量为31 Da、30 Da、29 Da、28 Da,使得四种iTRAQ试剂分子量均为145 Da,保证iTRAQ标记的同一肽段m/z相同。
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图1 iTRAQ 试剂结构
 
综上:
    4个来源不同的相同蛋白样品在一级质谱上表现相同;
    Balance group在二级质谱发生中性丢失;
    Reporter group 在二级质谱产生4个报告离子,分别是114、115、116和117;
    通过分析报告离子的峰强度比值就可以分析同一个蛋白在不同样品间的表达量比值。

操作流程:

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iTRAQ技术主要特点:

1.分离能力强、分析范围广
2.定性分析结果可靠,可以同时给出每一个组分的分子量和丰富的结构信息
3.MS具备高灵敏度、检测限低
4.分析时间快,分离效果好
5.自动化程度高
6.iTRAQ技术不仅可发现胞浆蛋白,还有膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白7.iTRAQ技术可检测出低丰度蛋白、强碱性蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白

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