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哺乳动物细胞表达系统

编辑:   上传日期:2016-02-01  阅读次数:

哺乳动物蛋白表达系,具备蛋白折叠和翻译后修饰的功能,使其蛋白更接近天然蛋白,从而获得与天然蛋白相同的生物活性。因此使得哺乳动物细胞表达系统在重组蛋白新葡京在线,特别是治疗性重组单抗新葡京在线的研发和生产中有最为广泛的应用。

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? 亚克隆
? 哺乳动物细胞瞬时表达
? 转染优化和表达检测(从1L培养基)
? 蛋白表达
哺乳动物表达系统
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哺乳动物表达系统特点与优势

按照宿主细胞的类型,可将基因表达系统大致分为原核、酵母、植物、昆虫和哺乳动物细胞表达系统。与其它系统相比,哺乳动物细胞表达系统的优势在于能够引导蛋白质的正确折叠,提供复杂的N型糖基化和准确的O型糖基化等多种翻译后加工功能,因而表达产物在分子结构、理化特性和生物学功能方面最接近于天然的高等生物蛋白质分子。

哺乳动物细胞表达系统:克隆基因要在哺乳动物细胞中进行表达,必须先将基因重组到适当的真核表达载体中。重组的表达载体在大肠杆菌中进行扩增,并从大肠杆菌中提取和纯化重组表达载体,然后将其导入哺乳动物细胞进行表达。在哺乳动物细胞中表达的基因,可以是基因组DNA,也可以是cDNA。 
编码真核蛋白的外源基因在真核细胞中表达时,表达产物对细胞本身的影响不大,蛋白质本身也很少被降解。因此真核表达载体的启动子大多是可以持续表达的,无需诱导。在筛选出转染细胞后,持续培养,便可在上清中得到表达产物。

哺乳动物表达系统应用领域:多种基因工程新葡京在线的生产平台;在新基因的发现、蛋白质的结构和功能研究中亦起了极为重要的作用。

哺乳动物表达系统

其他表达系统

1、昆虫表达系统
昆虫是高等真核生物,能进行翻译后加工和修饰。昆虫细胞常用于真核蛋白质的生产。其生长速度快,不需要CO2培养箱,易于悬浮培养,可用于大规模表达蛋白质。
杆状病毒表达系统利用一种不依赖于辅助病毒的病毒,该病毒可在适于悬浮培养的昆虫细胞中增殖至高滴度,能获得大量的重组蛋白,大部分超量表达的蛋白质为可溶性蛋白。杆状病毒对脊椎动物无感染性。
2、酵母表达系统
酵母菌是一种单细胞真核生物,能进行翻译后加工和修饰。酵母菌在特定的培养基中生长迅速,与哺乳动物细胞相比,易于操作和价格便宜。酵母表达系统是大规模表达重组真核蛋白的理想工具。

哺乳动物表达系统研究现状

①部分蛋白在哺乳动物细胞中的表达已从实验室研究迈向生产或中试生产阶段。        ②已有许多重要的蛋白及糖蛋白利用哺乳动物细胞系统表达和大量制备、生产。如人组织型血纤蛋白酶原激活因子、凝血因子Ⅷ、干扰素、乙肝表面抗原、红血球生成激素、人生长激素、人抗凝血素Ⅲ,集落刺激因子等。有些产品已投入临床应用或试用。         ③虽然经过多年努力,哺乳动物细胞表达系统的表达水平有大幅度增高,但从整个水平上看仍偏低,一般处在杂交瘤细胞单克隆抗体蛋白产率的下限,即1-30μg/l08细胞/24小时。有人认为其限速步骤可嚣是在工程细胞中(对于重组蛋白来讲,常是异源的),重组蛋白的分泌效率较低。


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